一般來(lái)說(shuō)，探索細(xì)胞信號(hào)通路往往意味著研究磷酸化，比如分析激酶活性，甚至副產(chǎn)物（如ADP）。在此，我們就來(lái)看看研究人員如何通過(guò)監(jiān)控激酶活性來(lái)研究細(xì)胞信號(hào)通路。開(kāi)發(fā)和生物技術(shù)中所使用的許多篩選都是生化分析，利用單個(gè)純化或重組的激酶將底物磷酸化。據(jù)賽默飛世爾研發(fā)部門的副總監(jiān)Kurt Vogel介紹，經(jīng)典的工具要算時(shí)間分辨熒光共振能量轉(zhuǎn)移（TR-FRET）分析，它們尋找不同條件下磷酸化活性的改變。在這個(gè)分析中，“底物通常是一個(gè)小的肽段，標(biāo)有熒光基團(tuán)。而磷酸化特異的抗體上標(biāo)有另一個(gè)熒光基團(tuán)。這樣當(dāng)抗體與磷酸化的肽段結(jié)合時(shí)，這兩個(gè)熒光標(biāo)記彼此接近，可以發(fā)生FRET。一旦確定了目標(biāo)化合物，人們也可以進(jìn)行反向篩選，也就是換一換，通過(guò)單個(gè)化合物來(lái)篩選不同的激酶。短信已成為現(xiàn)代社會(huì)中一個(gè)*的溝通渠道。在細(xì)胞中，磷酸化事件充當(dāng)了這一渠道。大量相互連接的細(xì)胞信號(hào)通路依賴激酶（和磷酸酶）將關(guān)鍵信息傳遞給一系列信使，有時(shí)候甚至從膜結(jié)合的表面分子一路傳遞給轉(zhuǎn)錄因子。許多信使分子本身就是激酶，有若干個(gè)絲氨酸、蘇氨酸和酪氨酸殘基，能夠可逆地接受無(wú)機(jī)磷（Pi）。檢測(cè)它們的磷酸化狀態(tài)，包括在狀態(tài)下如何改變，或如何被小分子所改變，是藥物篩選和基礎(chǔ)研究中的核心一環(huán)。
不過(guò)人們希望了解細(xì)胞信號(hào)通路系統(tǒng)，以及它們?nèi)绾问艿讲煌蛩氐挠绊?，今天我們還沒(méi)有可靠的分析來(lái)測(cè)定細(xì)胞裂解液中特定激酶的活性，由于大部分肽段和蛋白質(zhì)底物都是混雜的，它們能被各種內(nèi)源性激酶磷酸化，因此你實(shí)際上同時(shí)測(cè)定了幾種不同的蛋白激酶。
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