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如何使用動物酶免試劑盒不妨看看本篇吧
更新時間:2021-10-23   點擊次數(shù):1763次
  動物酶免試劑盒系由預包被豬藍耳病毒重組蛋白的酶標板、酶標記物及其他配套試劑組成,應用酶聯(lián)免疫法(ELISA)原理檢測豬血清、血漿樣本中豬藍耳病毒抗體。
 
  實驗時在酶標板中加入對照血清和待檢樣本,經(jīng)溫育后若樣品中含有豬藍耳病毒抗體,則將與酶標板上抗原結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的其他成分后;
 
  再加入酶標記物,與酶標板上抗原抗體復合物發(fā)生特異性結(jié)合;再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標記物,在孔中加TMB底物液,與酶反應形成藍色產(chǎn)物,顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān);
 
  加入終止液終止反應后,產(chǎn)物變?yōu)?用酶標儀在450nm波長測定各反應孔中的吸光值,即可知樣品是否含有豬藍耳病毒抗體。
 
  下面讓我們一起來了解一下動物酶免試劑盒的使用方法吧
 
  一、樣品準備
 
  1.取動物全血按常規(guī)方法制備血清,要求血清清亮,無溶血、無污染。樣品1周內(nèi)可于2~8℃保存,長期需置-20℃保存。
 
  2.用樣品稀釋液將待檢血清按40倍稀釋(如5μl血清加入195μl樣品稀釋液中,混勻)。陰、陽性對照不用稀釋。
 
  3.濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫使沉淀溶解,然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋。
 
  二、檢驗方法
 
  1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,恢復至室溫。
 
  2.取所需用量酶標板條,設空白對照1孔、陰性/陽性對照各2孔,未用的板條盡快密封,2~8℃保存。
 
  3.空白對照孔加樣品稀釋液100μl;陰、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照100μl;樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。
 
  4.混勻,置37℃反應30分鐘。
 
  5.扣去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,重復洗滌5次,拍干。
 
  6.每孔加酶標記物100μl(空白孔除外)。置37℃反應30分鐘。
 
  7.洗滌,同步驟5。
 
  8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,混勻,37℃避光反應10分鐘。
 
  9.每孔加終止液50μl,混勻,用空白孔調(diào)零,于450nm(可用630nm作參比波長)測定各孔吸光值(A值)。
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