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免疫組化實驗常見問題和解決方法
更新時間:2018-12-03   點擊次數(shù):1280次

免疫組化實驗常見問題和解決方法

 
免疫組化實驗的不順心是否讓你很苦惱,來看看基免生物為你支招解決各種免疫組化的疑難雜癥??!

染色過強

原因 解決方法 
抗體的濃度過高或抗體孵育時間過長 降低抗體滴度(一般指濃縮性抗體) 抗體孵育時間:室溫1小時或4℃過ye
 
孵育溫度過高,孵育溫度超過37℃ 一般室溫20-28℃ 
DAB 顯色時間過長或 DAB 濃度過高 顯色時間不能超過5-10分鐘,以顯微鏡下觀察為準(zhǔn) 

非特異性背景染色

原因 解決方法 
操作過程中沖洗不充分 每步?jīng)_洗3×5 
組織中含過氧化物酶未阻斷 可再配置新鮮3%H2O2封閉,孵育時間延長 
組織中含內(nèi)源性生物素 正常非免疫動物血清再封閉 
血清蛋白封閉不充分 延長血清蛋白封閉時間 

染色弱

原因 解決方法 
抗體濃度過低,孵育時間過短 提高抗體濃度,孵育時間不能少于60分鐘 
試劑超過有效使用期 及時更換試劑 
操作中,滴加試劑時緩沖液未瀝干,致使試劑稀釋 每步滴加試劑前瀝干切片中多余的緩沖液(但防止切片干燥) 
室溫太低,低于15℃ 若室溫低于15度,要改放在37℃孵育箱孵育30-60分鐘(或4℃冰箱過ye) 
蛋白封閉過度 封閉時間不要超過10分鐘 

染色陰性

原因 解決方法 
操作步驟錯誤 重新試驗,設(shè)立陽性對照 
組織中無抗原 設(shè)立陽性對照片,以驗證實驗結(jié)果 
一抗與二抗種屬連接錯誤 仔細(xì)確定一抗與二抗種屬無誤 

對實驗有任何問題和建議,對公司產(chǎn)品有任何疑問的,都咨詢或在線咨詢,上?;馍锝哒\為您服務(wù)!

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